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En 1991, el supersoldado James «Bucky» Barnes, con el cerebro lavado, es enviado desde una base de Hydra en Siberia a interceptar un automóvil que lleva un maletín de suero de supersoldado. En la actualidad, aproximadamente un año después de la derrota de Ultrón en la nación de Sokovia a manos de los Vengadores,N 1​ Steve Rogers, Natasha Romanoff, Sam Wilson, y Wanda Maximoff evitan que Brock Rumlow robe un arma biológica de un laboratorio en Lagos. Rumlow se inmola con una explosión, en un intento de matar a Rogers. Maximoff usa su telequinesis para contener la explosión y tirarla hacia arriba, dañando un edificio cercano y matando a varios trabajadores humanitarios wakandianos.

El secretario de Estado Thaddeus Ross le informa a los Vengadores que la Organización de las Naciones Unidas (ONU) se está preparando para aprobar los Acuerdos de Sokovia, que establecerán un panel de la ONU para supervisar y controlar al equipo. Los Vengadores están divididos: Tony Stark apoya la supervisión debido a su papel en la creación de Ultrón y la devastación de Sokovia, mientras que Rogers cree más en su propio juicio que en el del Gobierno. Mientras tanto, Helmut Zemo rastrea y mata al antiguo agente de Hydra encargado de Barnes, robando un libro con las palabras clave que activan el lavado de cerebro de Barnes. En una conferencia en Viena donde se ratificarán los Acuerdos, una bomba mata al rey T'Chaka de Wakanda. Las imágenes de seguridad indican que el bombardero es Barnes, a quien el hijo de T'Chaka, T'Challa, jura matar. Informado por Sharon Carter del paradero de Barnes y las intenciones de matarlo de las autoridades, Rogers decide intentar traer a Barnes —su amigo de la infancia y camarada de guerra— él mismo. Rogers y Wilson rastrean a Barnes hasta Bucarest e intentan protegerlo de T'Challa y las autoridades, pero los cuatro, incluido T'Challa, son detenidos.

Personificando a un psiquiatra enviado a entrevistar a Barnes, Zemo recita las palabras para que Barnes lo obedezca. Interroga a Barnes y lo envía a hacer alboroto para cubrir su propio escape. Roger detiene a Barnes y se lo lleva a escondidas. Cuando recupera la conciencia, Barnes explica que Zemo es el verdadero bombardero de Viena y que quería la ubicación de la base de Hydra en Siberia, donde hay otros soldados del invierno de cerebro lavado en estasis criogénica. Reacios a esperar autorización para aprehender a Zemo, Rogers y Wilson se rebela, y reclutan a Maximoff, Clint Barton, y Scott Lang para su causa. Con el permiso de Ross, Stark forma un equipo compuesto por Romanoff, T'Challa, James Rhodes, Visión, y Peter Parker para capturar a los renegados. El equipo intercepta al grupo de Rogers en el Aeropuerto de Leipzig/Halle, donde pelean hasta que Romanoff permite a Rogers y Barnes escapar. El resto del equipo de Rogers es capturado y detenido en la prisión Raft, mientras que Rhodes queda parcialmente paralizado después de ser derribado de un disparo no intencional de Visión, y Romanoff se exilia.

Stark descubre evidencias de que Barnes fue inculpado por Zemo y convence a Wilson para que le diga el destino de Rogers. Sin informarle a Ross, Stark va a las instalaciones de Hydra en Siberia y hace una tregua con Rogers y Barnes, sin saber que T'Challa los estaba siguiendo en secreto. Ellos encuentras que los otros supersoldados fueron asesinados por Zemo, que luego les muestra un vídeo que revela que en el coche que Barnes había interceptado en 1991 estaban los padres de Stark, a quien Barnes luego mató. Enfurecido de que Rogers le haya ocultado esto, Stark se vuelve contra ambos, llevando a un intenso combate, en el que Stark destruye el brazo robótico de Barnes, y Rogers desactiva la armadura de Stark. Él se va con Barnes, dejando atrás su escudo. Satisfecho de que ha vengado la muerte de su familia en Sokovia por las acciones de los Vengadores mediante la fractura del equipo, Zemo intenta suicidarse, pero T'Challa lo detiene y lo entrega a las autoridades.

A raíz de estos episodios, Stark le da a Rhodes uexoesqueleto para sus piernas que le permita volver a caminar, mientras que Rogers saca a sus aliados de la prisión Raft. En una escena entre créditos, Barnes, con asilo concedido en Wakanda, opta por volver al sueño criogénico hasta que se encuentre una cura para su lavado de cerebro. En una escena poscréditos, Parker explora las características de los disparadores de telaraña que Stark le construyó.